迷你垂直电泳仪注意事项工作原理 基于电场驱动与凝胶分子筛效应,利用聚丙烯酰胺凝胶在垂直电场中按分子量大小分离带电生物大分子(主要为蛋白质)。 核心工作原理 电场驱动:直流电源在垂直凝胶上下两端建立电场,SDS 处理后带负电的蛋白质从负极(上槽)向正极(下槽)定向迁移 。 凝胶筛分:聚丙烯酰胺凝胶形成三维网状结构,小分子阻力小迁移快,大分子阻力大迁移慢,从而实现高分辨率分子量分离 。 垂直优势:垂直板“三明治"结构减少缓冲液蒸发与热扩散,提高条带清晰度与重复性 。 标准操作流程 组装制胶:清洗玻璃板并装入制胶架,配制分离胶灌入凝固后,再灌浓缩胶并插入梳子 。 安装电泳槽:将凝固的凝胶板(短玻板向内)装入电泳芯,确保密封垫压紧防漏,放入电泳槽 。 加样准备:注入缓冲液(内槽没过短玻板,外槽至上限),小心拔出梳子,用移液器将样品加入孔底 。 通电运行:上槽接负极(黑),下槽接正极(红),设定恒压/恒流参数启动电泳,直至指示剂到达底部 。 取出分析:断电拆卸,剥开玻璃板取出凝胶,进行染色或转膜后续处理 。 关键注意事项 极性确认:严禁接反电极(上负下正),否则样品会跑出凝胶;遵循“红对红、黑对黑"连接原则 。 防漏检查:组装时必须确认短玻璃板嵌入密封槽凹槽内,否则缓冲液短路导致实验失败 。
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